蛋白濃度測定的方法有很多，但每種方法都有其特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)姆椒�，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果精確，但操作復雜，用于大批量樣品的測試則不太合適；Lowry法精確度較高，但是比較費時，且每步的時間要求相對嚴格；Bradford法靈敏簡便，但易受去垢劑的影響；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力強，結果穩(wěn)定，靈敏度高而受歡迎。

1. Bradford法：

原理：在酸性環(huán)境中，蛋白質結合考馬斯亮藍G250染料，導致染料的吸收峰發(fā)生位移，從紅棕色形式（吸收峰 465nm）轉化為藍色形式（吸收峰 610nm）。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異most大，因此 595nm 是測定考馬斯染料-蛋白復合物的藍色的best波長。結合到每個蛋白質分子上的考馬斯染料分子數(shù)大致與蛋白所帶正電荷的數(shù)量成正比，因此通過比色法可以測定溶液中蛋白質的含量。

優(yōu)點：

1. 靈敏度高，可以檢測到1μg/ml的蛋白質濃度。

2. 反應時間短，反應時間只需5-10分鐘。

3. 操作簡單，只需加入試劑，混合均勻即可。

4. 適用范圍廣，適用于大部分類型的蛋白質。

5. 不受溶液中還原劑的影響。

缺點：

1. 受干擾：某些離子和化合物會干擾測定結果，去垢劑（表面活性劑）會產(chǎn)生強烈干擾，使得與許多常用的緩沖液不兼容。

2. 靈敏度不穩(wěn)定：不同蛋白質的靈敏度不同，有些蛋白質可能無法被檢測到。肽或蛋白質的分子量必須大于 3,000 道爾頓才能被檢出。

3. 需要標準曲線：需要制備標準曲線來計算蛋白質濃度，增加了操作步驟。

近來市場上已出現(xiàn)能兼容去垢劑的Bradford法蛋白定量試劑盒，可以兼容各種常用的蛋白緩沖液，大大拓展了應用范圍。